Principiile care ghidează microbiologii în cercetarea microbiologică sanitară se bazează pe sarcina principală pe care o rezolvă: determinarea posibilității prezenței microorganismelor patogene sau a toxinelor produse în timpul activității lor vitale în obiectul studiat, precum și detectarea și evaluarea gradului de alterare. produse alimentare.
Primul principiu este prelevarea corecta pentru studii sanitare si microbiologice cu respectarea tuturor conditiilor necesare reglementate pentru fiecare obiect aflat in studiu si reguli de sterilitate. Erorile făcute la prelevarea probelor conduc la rezultate incorecte și nu pot fi corectate. La ambalarea și transportul probelor, este necesar să se creeze condiții care să prevină moartea sau proliferarea microflorei originale în obiectul studiat, ceea ce poate distorsiona rezultatele cercetării. Prin urmare, una dintre reguli este, probabil, să efectuați rapid cercetări și, dacă este necesar, să păstrați materialul numai într-un frigider și nu mai mult de 6-8 ore. Fiecare probă este însoțită de un document care indică numele materialului testat, numărul eșantionului, ora, locul recoltării, caracteristicile obiectului și semnătura persoanei care a prelevat proba.
Al doilea principiu– analizele în serie se bazează pe caracteristicile obiectelor studiate. De regulă, apa, solul, aerul și alte obiecte conțin o varietate de microorganisme, a căror distribuție este neuniformă. În plus, microorganismele, aflate în relații biocenotice, sunt supuse influenței reciproce, ceea ce duce la moartea unora și la reproducerea activă a altora. Prin urmare, se prelevează o serie de mostre din diferite părți ale obiectului studiat, cât mai multe eșantioane, ceea ce va permite obținerea unei caracteristici mai fiabile a obiectului. Se amestecă probele livrate laboratorului, apoi se măsoară cu precizie cantitatea necesară de material - media în raport cu materialul testat în ansamblu.
Al treilea principiu– eșantionarea repetată este necesară pentru a obține rezultate comparabile. Acest lucru se datorează, în primul rând, faptului că obiectele studiate sunt foarte dinamice (apă, aer etc.), variabilitatea microflorei din ele în timp și spațiu este foarte mare. Intră microorganismele patogene mediu, de regulă, în cantități mici și sunt distribuite uniform în ea. Prin urmare, prelevarea repetată face posibilă determinarea mai precisă a contaminării biologice a obiectelor din mediu.
Al patrulea principiu– utilizarea metodelor standard și unificate aprobate de GOST și instrucțiuni relevante, ceea ce face posibilă obținerea de rezultate comparabile.
Al cincilea principiu– la evaluarea obiectelor aflate în studiu, utilizând concomitent un set de teste pentru obținerea unor caracteristici sanitare și microbiologice cuprinzătoare. Aplicați direct metoda de detectare a microorganismelor patogene si indirect- care să permită judecarea poluării obiectelor din mediu prin secreții umane și animale și gradul acesteia. Testele indirecte includ determinarea numărului microbian total, a compoziției cantitative și calitative a microorganismelor indicative sanitare. Utilizarea metodelor indirecte pentru evaluarea potențialului de contaminare a obiectelor din mediu cu microorganisme patogene, utilizarea unei soluții pentru a studia contaminarea materialelor, este o caracteristică a cercetării microbiologice sanitare.
Al șaselea principiu– constă în efectuarea unei evaluări a obiectelor studiate pe baza totalitatii rezultatelor obtinute atunci când se utilizează teste sanitare și microbiologice ale altor indicatori de igienă specificați în GOST-urile și standardele relevante (organoleptice, chimice, fizice etc.). Este întotdeauna necesar să se țină cont de faptul că dezvoltarea microbilor este strâns legată de alți factori de mediu, care pot avea atât efecte benefice, cât și nefavorabile, sporind sau limitând oportunitățile de proliferare a microorganismelor patogene și de acumulare a toxinelor acestora. De asemenea, trebuie luat în considerare faptul că aproape orice obiect de studiu are propria microfloră, care provoacă procese biochimice specifice și acele modificări ale obiectelor care sunt cauzate de microorganisme străine. Un microbiolog sanitar trebuie să aibă o bună cunoaștere a cursului proceselor biochimice care au loc în mod normal și în obiectul studiat (materii prime, produse alimentare, produse finite etc.), a tehnologiei de producție, să poată determina natura efectelor nocive ale microbii ingerați, posibilele consecințe ale unor astfel de efecte și recomandă măsuri specifice privind avertizarea acestora. Adesea, un medic trebuie să recurgă la ajutorul specialiștilor din domeniul microbiologiei generale, agricole, industriale și veterinare și să rezolve problema cu participarea directă a specialiștilor relevanți.
Al șaptelea principiu– responsabilitatea medicilor serviciului sanitar pentru acuratețea fundamentarii constatărilor și concluziilor despre starea obiectelor studiate. Un studiu microbiologic sanitar relevă gradul de deteriorare a produselor alimentare (sau a altor obiecte), adecvarea acestora pentru consum și posibilul pericol pentru sănătatea publică. Dacă produsele alimentare pot fi vândute, medicul trebuie să dea o recomandare rezonabilă asupra modului cel mai rațional de procesare și consumare a acestora. Este interzisă utilizarea produselor alimentare, a apei din rezervoare etc. Închiderea unei întreprinderi din cauza problemelor sanitare provoacă anumite prejudicii economice. Medicul serviciului sanitar este responsabil pentru o astfel de decizie. Pentru o mai mare obiectivitate în evaluarea rezultatelor și concluziilor, medicii folosesc instrucțiuni speciale, standarde, GOST, elaborate de instituții sanitare și microbiologice specializate și aprobate de Ministerul Sănătății. Aceste standarde sunt revizuite periodic și aduse în conformitate cu schimbările rezultate din experiența practică, capacitățile materiale, stadiul actual al cunoștințelor și evoluțiile tehnologice.
Microbiologia sanitară modernă se străduiește să utilizeze metode simple, precise și fiabile. Aceste metode au ca scop determinarea contaminării microbiene generale, identificarea SPM și includ: numărarea directă în timpul microscopiei a microorganismelor dintr-un obiect; metode de izolare și identificare a microorganismelor; metode biologice folosind animale de laborator.
Numărarea directă utilizat în cazuri de urgență când este nevoie de un răspuns urgent cu privire la conținutul cantitativ al bacteriilor (de exemplu, în cazul unor accidente în sistemul de alimentare cu apă, la evaluarea eficienței muncii facilitati de tratament etc.). Principalul dezavantaj este incapacitatea de a obține un răspuns precis datorită formării de aglomerate de către bacterii sau atașării la particulele mediului. Metoda nu permite deosebirea bacteriilor vii de cele moarte.
Semănat pe medii nutritive efectuate pentru calcul cantitativ. Pe medii nutritive solide, se numără numărul de colonii crescute. În acest caz, pornim de la presupunerea că fiecare colonie este rezultatul unei celule viabile care intră în mediu.
Această metodă este inexactă, deoarece detectează numai grupuri de microorganisme care cresc pe anumite medii nutritive la o anumită temperatură. Este imposibil să se creeze un mediu unitar potrivit pentru toate microorganismele. Nu toate microorganismele prezente în obiect produc colonii pe mediul nutritiv din cauza competiției și antagonismului.
Conținutul numărului de celule vii dintr-un obiect reflectă indicatorul numărului de microorganisme mezofile aerobe și anaerobe facultative (QMAFAnM), care este determinat prin numărarea coloniilor crescute într-un mediu de agar în vase Petri la o temperatură de (30±1). ) 0 C timp de (72±3) ore. Această definiție este reglementată Organizație internațională privind standardizarea metodelor analiza microbiologică(International Standard Organization, ISO) și GOST 10444.15-94. QMAFAnM este exprimat în unități formatoare de colonii (CFU) și este calculat pentru 1 g sau 1 cm3 de probă.
Termenul KMAFAnMCOE/g (cm 3 ) caracterizează cel mai pe deplin grupul de microorganisme determinat prin metode acceptate, de aceea este utilizat în prezent în locul denumirilor utilizate anterior (număr total de bacterii, număr de saprofite, heterotrofe) la 1 g (cm 3 ). ), numărul total de microbi).
Indicatorii microbiologici ai siguranței alimentelor pentru majoritatea grupurilor de microorganisme sunt evaluați de semn alternativ, adică masa produsului este standardizată, în care prezența nu este permisă anumite tipuri microorganisme.
Pentru contabilitate cantitativă SPM utilizează, de asemenea, două grupuri de tehnici - determinarea indicelui și a titrului.
Index– numărul de indivizi de microorganisme sanitar-indicative găsite într-un anumit volum sau cantitate din obiectul studiat (pentru apă în 1 dm 3, pentru sol, sedimente de fund etc. - în 1 g).
Titrul- este cel mai mic volum al materialului studiat în cm 3 sau cantitate de masă în grame în care a fost găsit cel puțin un individ al unui organism indicativ sanitar.
Indicele este reciproca titrului și invers, titrul este reciproca indicelui.
Microflora mediului
Microflora apei
Apa este habitatul natural pentru o varietate de microorganisme. În apa râurilor, rezervoarelor deschise, mărilor și oceanelor se găsesc reprezentanți ai tuturor grupurilor taxonomice de microorganisme - bacterii, viruși, ciuperci, protozoare, alge. Totalitatea tuturor microorganismelor care locuiesc în corpurile de apă se numește plancton microbian.
Microflora apelor naturale depinde în mare măsură de originea acestora. Apele se disting: suprafata proaspata– curgătoare (apa râurilor, pâraielor) și stătătoare (apa lacurilor, iazurilor, lacurilor de acumulare); subteran– pământ, pământ, artezian; atmosferice– ploaie, ninsoare; maritim. Apa este clasificată în funcție de natura utilizării acesteia. baut(poate fi de alimentare cu apă centralizată și locală, în care captarea este din rezervoare deschise sau surse subterane), apă din piscine, gheață menajeră. Necesită o atenție deosebită din punct de vedere sanitar apa reziduala– apa menajera-fecala, industriala, mixta (domestic-fecala si industriala), de topire si de furtuna, a caror microflora polueaza apele naturale. Din punct de vedere ecologic, întreaga microfloră a corpurilor de apă poate fi împărțită în două grupe - autohtonă și alohtonă.
Microflora autohtonă sunt microorganisme care trăiesc și se reproduc în apă. Compoziția microflorei autohtone a corpurilor de apă nepoluate este relativ stabilă și caracteristică fiecărui corp de apă individual. Microflora halofilă este tipică pentru mări și lacurile sărate, termofilă pentru izvoarele termale și psicrofilă pentru rezervoarele din nord. Populația microbiană a apei reflectă și compoziția microflorei solului cu care apa intră în contact direct. Microflora autohtonă joacă un rol semnificativ în ciclul substanțelor din natură, în procesele de autoepurare a corpurilor de apă și menținerea echilibrului biologic al acestora.
Microflora alohtonă– acestea sunt microorganisme aduse cu diverși contaminanți. Printre aceștia se numără atât reprezentanți ai microflorei normale a corpului uman, cât și animale cu sânge cald, precum și agenți patogeni ai diferitelor boli. Condițiile rezervoarelor nu sunt un mediu favorabil pentru proliferarea microorganismelor alohtone, astfel încât acestea mor după un anumit timp.
Relația dintre microflora autohtonă și cea alohtonă determină în mare măsură eficacitatea eliberării corpurilor de apă de poluarea cu substraturi organice și microorganisme patogene, adică. autopurificarea rezervoarelor.
Saprobitate(gr. sapros– putred) – gradul de poluare a corpurilor de apă cu substanţe organice. După scara saprobică se disting trei zone: polisaprobică, mezosaprobică și oligosaprobică. Scala de saprobitate a fost propusă în 1908 de Kolkwitz și Marsson.
Zone polisaprobice(zonele cu poluare puternică) conțin o cantitate mare de substanțe organice care se descompun ușor și, prin urmare, sunt absorbite de microorganisme. Aceste zone sunt aproape complet lipsite de oxigen. Populația microbiană este deosebit de abundentă, dar numărul speciilor este limitat. Microorganismele sunt reprezentate în principal de bacterii anaerobe, precum și de ciuperci și actinomicete, care provoacă procese de degradare și fermentație. Sub influența acestor microorganisme, compușii organici complecși se descompun în alții simpli cu formarea de amoniac, hidrogen sulfurat, dioxid de carbon, metan, indol, skatol etc. Numărul de bacterii din 1 cm 3 de apă în această zonă ajunge la un milion. sau mai multe. Bacteriile în formă de tijă sunt detectate predominant (până la 80% sau mai mult).
Zone mezosaprobice(zonele de poluare moderată) se caracterizează prin predominarea proceselor oxidative și nitrificare. Compușii care conțin azot se descompun în amoniac, care este oxidat în nitriți și nitrați. Numărul total de microorganisme este de asemenea mare - sute de mii în 1 cm 3 de apă. Compoziția calitativă a microflorei este diversă. Acestea sunt în principal bacterii nitrificatoare, care sunt aerobi obligatorii. Nu mai puțin importantă este participarea microorganismelor acvatice la mineralizarea compușilor care conțin carbohidrați - celuloză, lignină etc. Aceste microorganisme includ bacterii aerobe și anaerobe facultative ale genurilor. Pseudomonas, Mycobacterium, Flavobacterium, genuri de ciuperci Streptomyces, Candidași altele, precum și bacterii anaerobe ale genului Clostridium.
Zone oligosaprobice(zonele cu apă curată) se caracterizează prin sfârșitul procesului de autopurificare și o cantitate mică de substanțe organice. Mineralizarea materiei organice se termină. Compoziția în specii a microflorei se apropie de flora autohtonă obișnuită. Numărul de microorganisme în 1 cm 3 de apă este în zeci, mai rar în sute. ÎN ape curate predomină cocii (până la 80% sau mai mult).
Procesele de autopurificare a apei din rezervoare au loc secvenţial şi continuu, caracterizate printr-o schimbare treptată a biocenozelor. Procesele de autopurificare sunt influențate de o serie de factori: diluarea apei contaminate cu apă curată, transparența apei, temperatura, sedimentarea particulelor contaminate, prezența chimicale, relații simbiotice și antagonice în biocenozele acvatice.
Microflora solului
Solul este principalul rezervor și habitatul natural al microorganismelor din natură. Solul se formează pe solul care este distrus prin acțiunea lui conditiile climatice roci cu participarea compușilor organici formate ca urmare a descompunerii organismelor vegetale și animale. Microorganismele din sol participă activ la procesele de formare și autopurificare a solului, precum și în ciclul substanțelor din natură.
Compoziția cantitativă a microflorei solului depinde de structura acesteia, de conținutul de compuși organici și minerali, precum și de umiditate, aciditate, aerare, temperatură și alți factori. Numărul de microorganisme din 1 g de sol poate ajunge la câteva miliarde. Majoritatea se găsesc în sol îngrădit, cultivat, mai puțin în nisip. Numărul de microorganisme este supus fluctuațiilor sezoniere - primăvara populația microbiană crește, atingând un maxim vara, la apogeul verii scade (ca urmare a expunerii celei mai active la lumina soarelui), crește din nou toamna , iar iarna scade. Distribuția microorganismelor în profunzime este, de asemenea, neuniformă. Sunt relativ puține microorganisme la suprafață într-un strat de 1-2 mm grosime datorită influenței iradierii ultraviolete. Cea mai abundentă microfloră se află în stratul de la o adâncime de 10-20 cm, unde au loc principalele procese biochimice. În straturile mai adânci ale solului, microflora devine mai rară, iar la o adâncime de 4-5 m se găsesc foarte puține microorganisme.
Compoziția calitativă a microflorei solului este foarte diversă. Ca parte a microflorei solului, pot fi distinse diferite grupuri fiziologice de microorganisme, care participă la diferite procese în diferite etape ale descompunerii treptate a materiei organice. 1) Microorganisme amonifiante care cauzează putrezirea resturilor de plante, cadavrelor de animale și descompunerea ureei. 2) Bacteriile nitrificatoare, care au capacitatea de a oxida amoniacul la acid azotic, formând nitriți. 3) Microorganismele care descompun fibrele, provocând diverse tipuri fermentaţie. 5) Bacteriile implicate în ciclul sulfului, fosforului, sulfului și a altor elemente.
Cu excreții umane și animale, cu diverse ape uzate menajere și industriale, un număr imens de diferite microorganisme, inclusiv cele patogene, intră în sol. Dintre microorganismele patogene se pot distinge trei grupuri. 1) microorganisme patogene care trăiesc constant în sol. Acestea includ un număr mic de microorganisme. Printre acestea se remarcă în mod deosebit botulismul clostridiilor, care intră în sol cu fecale umane și animale, formează spori și rămân în sol mult timp. 2) Microorganisme patogene formatoare de spori (bacil antrax, clostridium tetanos și gangrena gazoasă), pentru care solul este un rezervor secundar. În condiții favorabile, aceste microorganisme se pot înmulți în sol și persistă sub formă de spori mult timp. 3) Microorganisme patogene care intră în sol cu excreții de oameni și animale și persistă în acesta câteva săptămâni sau luni. Aceste microorganisme (Salmonella, Shigella, Vibrio, Mycobacteria, Leptospira, Brucella etc.) nu formează spori și, prin urmare, mor rapid ca urmare a expunerii la diverși factori fizici și biologici.
Procesele biochimice naturale care au loc sub influența microorganismelor determină autopurificarea și neutralizarea solului. Prin gestionarea adecvată a acestor procese, riscul transmiterii bolilor infecțioase prin sol poate fi minimizat.
Microflora aerului
Aerul nu este habitatul natural al microorganismelor, dar joacă un rol important în răspândirea lor. Microorganismele pătrund în aer din sol, apă, din corpul uman și din diverse animale. În cele mai multe cazuri, aceste microorganisme nu se pot reproduce din cauza lipsei de nutrienți și a lipsei de umiditate.
Sursa de poluare a aerului cu microorganisme este în principal solul. Microflora aerului atmosferic este influențată de lumina soarelui, fluctuațiile de temperatură, viteza vântului, precipitații și prezența spațiilor verzi. Microflora aerului atmosferic este predominant saprofită. În aerul atmosferic sunt mai multe microorganisme vara (mai ales pe vreme uscată) și mai puține iarna.
Contaminarea aerului din interior cu microorganisme depășește întotdeauna contaminarea aerului atmosferic. Acest lucru este valabil și pentru microflora patogenă, care poate proveni de la oameni bolnavi, animale și purtători microbieni. În spațiile închise, microflora aerului este mai abundentă iarna, ceea ce este asociat cu o ventilație mai redusă. Contaminarea aerului de către microorganisme are loc în principal prin picături - când se vorbește, tusește, strănut. De asemenea, este posibil ca microorganismele să intre cu epiderma decojită a pielii sau cu praful de la obiectele contaminate.
Mecanismul de transmitere a prafului din aer și din aer al bolilor infecțioase se bazează pe teoria aerosolilor. Aerosoli este un sistem coloidal format din aer, picături lichide sau particule solide, inclusiv un număr semnificativ de microorganisme. Acest aerosol este eliberat de fiecare persoană sau animal atunci când respiră, tusește etc. Dimensiunea picăturilor de aerosoli poate fi diferită - de la 10-100 la 2000 nm. În funcție de dimensiunea picăturilor, de sarcina lor electrică și de viteza de mișcare în aer, se disting fazele de picături, de praf ale aerosolului și nucleolii de picături. Faza de scădere Aerosolul se caracterizează prin prezența unor mici picături în aer care rămân în el mult timp și se usucă înainte ca acestea să aibă timp să se așeze. Picăturile mari de aerosoli se depun rapid sub influența gravitației și se usucă, formând praf, care în anumite condiții se ridică în aer - acest lucru faza de praf aerosoli. Picăturile mici de aerosol (până la 100 nm), care se usucă, rămân suspendate în aer și formează un sistem aerodispers stabil - nucleoli picături, care poate fi transportat pe distanțe considerabile. Umiditatea este reținută parțial în nucleolii picături, ceea ce determină viabilitatea microorganismelor din acestea. Cel mai mare pericol pentru sănătate îl reprezintă microorganismele în particule mici (până la 100 nm), care sunt capabile să pătrundă adânc în alveolele plămânilor, depășind barierele de protecție ale tractului respirator superior.
Boli transmise prin alimente
(include determinarea contaminării microbiene totale (TMC), determinarea și titrarea microorganismelor indicator sanitar).
Starea sanitară și microbiologică a aerului spațiile interioare se evaluează după numărul total de microbi (TMC) - numărul de indivizi găsiți în 1 m 3 de aer, prezența bacteriilor indicatoare sanitare: streptococi hemolitici, Staphylococcus aureus, precum și ciuperci de drojdie și mucegai.
Conform SanPiN 2.1.3.1375-03, mediul de aer interior institutii medicale iar farmaciile, în funcție de nivelul de contaminare bacteriană, sunt împărțite în 4 clase.
Indicatori microbiologici pentru evaluare mediul aerian Instituțiile de farmacie pot fi determinate prin inocularea aerului folosind metoda sedimentării (după Koch) sau metoda aspirației (în aparatul Krotov).
Niveluri admisibile de contaminare bacteriană a mediului aerian al instituțiilor medicale, în funcție de acestea
scop funcțional și clasa de curățenie
| Clasa de curatenie | Denumirea sediului | Indicatori sanitari si microbiologici | |||||
| numărul total de microorganisme în 1 m 3 de aer (CFU/m 3) | numărul de colonii de S.aureus în 1 m 3 de aer (CFU/m 3) | numărul de ciuperci de mucegai și drojdie în 1 dm3 de aer | |||||
| Înainte de începere | În timpul lucrului | Înainte de începere | În timpul lucrului | Înainte de începere | În timpul lucrului | ||
| Extra pur (A) | Săli de operație, maternitate, cutii aseptice pentru bolnavi hematologici și arși, secție pentru prematuri, bloc aseptic de farmacii, cutii sterilizare (jumătate curată) laboratoare bacteriologice | nu mai mult de 200 | nu mai mult de 500 | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie |
| Curat(B) | Săli de tratament, vestiare, săli preoperatorii, săli de terapie intensivă, săli de terapie intensivă, saloane pentru copii, săli de colectare și pasteurizare a laptelui matern, farmacii asistente și ambalare, sală de distilare, cabinete bacteriologice și laboratoare clinice, destinat cercetării | nu mai mult de 500 | nu mai mult de 750 | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie |
| Condițional pur (B) | sectii chirurgicale; coridoare adiacente sălilor de operație și sălilor de naștere; săli de examinare, boxe și secții ale secțiilor de boli infecțioase, săli de personal, săli de materiale, încăperi de depozitare a lenjeriei curate | nu mai mult de 750 | nu mai mult de 1000 | nu ar trebui să fie | nu mai mult de 2 | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie |
| murdar (G) | Coridoare și camere clădiri administrative, scari, camere de tratament si diagnostic, camere sanitare, toalete, lenjerii murdare | Nestandardizat |
Metoda de sedimentare(după Koch) - așezarea microbilor sub influența gravitației - este într-un mod simplu studiul microflorei aerului. Constă în lăsarea vaselor Petri cu mediul deschis un anumit timp (5-10 minute pentru contaminarea totală și minim 40 minute pentru microflora cocică), apoi se închid, se etichetează și se păstrează 24 de ore în termostat și 24 de ore la temperatura camerei. Numărul de colonii crescute corespunde gradului de poluare a aerului: conform unui calcul aproximativ, pe o suprafață de 100 cm 2 se instalează în decurs de 5 minute atâția microbi cât sunt conținute în 10 litri de aer.
Metoda de aspirație– o metodă cantitativă mai precisă pentru determinarea numărului microbian de aer. Semănatul cu aer se realizează cu ajutorul dispozitivelor. Aparatul lui Krotov este proiectat în așa fel încât aerul să fie aspirat cu o viteză dată printr-o fantă îngustă a unei plăci de plexiglas care acoperă un vas Petri cu agar nutritiv. În acest caz, particulele de aerosoli cu microorganisme conținute pe ele sunt fixate uniform pe întreaga suprafață a mediului datorită rotației constante a cupei sub fanta de intrare.
După incubarea culturii într-un termostat, numărul microbian este calculat folosind formula:
| OMC | = | N ∙ 1000 |
| V |
unde N este numărul de colonii crescute pe placă;
V – volumul de aer trecut prin aparat, dm 3;
1000 - volumul necesar de aer, dm 3.
Prezența microorganismelor sanitar-indicative pentru aer - Staphylococcus aureus, streptococ hemolitic, ciuperci de mucegai, candida - este determinată de natura coloniilor crescute pe medii speciale (agar-gălbenuș, agar sânge, mediu Sabouraud) și prin examen microscopic. de bacterii din aceste colonii.
Care sunt caracteristicile sistemelor enzimatice bacteriene? Tipuri de enzime: după acţiunea lor; la eliberarea în mediu; enzime constitutive și adaptive. Care este semnificația practică a studierii activității enzimatice a bacteriilor? Metode de studiere a activității proteolitice și zaharolitice a bacteriilor. Medii de diagnostic diferențial: enumerați, denumiți componentele principale și aplicația. La ce schimbare de mediu reacționează indicatorul în aceste medii? După ce criterii sunt diferențiate bacteriile pe mediile Endo, Levin și Ploskirev? Ce proprietate trebuie să aibă bacteriile pentru a forma colonii colorate pe aceste medii? Dacă bacteriile formează colonii incolore, ce înseamnă asta? Hiss media, compoziția și aplicarea lor. Ce este o serie „pestrită” sau „colorată”? Mediul lui Olkenitsky, cum se face însămânțarea și cum se notează proprietățile enzimatice ale bacteriilor pe acest mediu? Metode de determinare a activității proteolitice a bacteriilor: lichefierea gelatinei, formarea indolului, hidrogen sulfurat, amoniac. Ce sunt sistemele de microtestare pentru determinarea activității enzimatice a bacteriilor: cum sunt acestea inoculate și cum sunt luate în considerare rezultatele? Ce este NIB, cum se utilizează acest sistem, cum se face însămânțarea și se înregistrează rezultatele Microflora aerului: ce microbi se găsesc cel mai des, cum se modifică microflora în funcție de condiții? Care este numărul microbian al aerului, prin ce metode se determină? Ce sunt microorganismele indicatoare sanitare? Ce microbi sunt considerați indicatori sanitari pentru aer? Care microbi patogeni poate fi transmisă prin aer Definiți conceptele: microfloră normală a corpului uman; microfloră constantă; microorganisme tranzitorii; microorganisme potențial periculoase. Numiți organele și țesuturile lipsite de microfloră permanentă. Ce microbi aparțin microflorei permanente a cavității bucale și ce semnificație au aceștia în condiții normale și patologice? Caracteristicile microflorei diferitelor zone ale corpului: cavitatea bucală, tractul gastro-intestinal, organele respiratorii. Valoarea microflorei normale este pozitivă și negativă. Ce este disbacterioza, cum se manifestă, cauzele apariției sale și metodele de prevenire și eliminare. Numiți medicamentele folosite pentru a elimina disbioza, ce conțin, cum sunt utilizate, ce se întâmplă cu ele în corpul uman.
Material suplimentar pentru lecție.
Microbiologie sanitară– o ramură a microbiologiei medicale care studiază microflora mediului și efectul acesteia asupra sănătății umane. Microbiologia sanitară dezvoltă metode de monitorizare a stării apei, solului, aerului, alimentelor și diverselor articole de uz casnic. În același timp, microbiologia sanitară dezvoltă standarde microbiologice și măsuri de îmbunătățire a mediului.
Microbiologia sanitară practică utilizează 2 metode principale de evaluare a stării sanitare și epidemiologice mediu extern: detectarea directă a microorganismelor patogeneŞi identificarea semnelor indirecte ale prezenței agenților patogeni în mediul extern.
Detectarea directă a microorganismelor patogene este de obicei dificilă din cauza numărului lor mic și se realizează conform indicațiilor epidemiologice. metode indirecte - aceasta este definitia contaminare microbiană generală sau numărul total de microbi (TMC), precum si determinarea si titrarea microorganisme indicatoare sanitare (SIM), care sunt efectuate în mod regulat de autoritățile de reglementare pentru a determina siguranța instalațiilor pentru sănătatea publică.
TMC este privit ca un indicator al intensității poluării mediului cu substanțe organice.
Indicativ sanitar se numesc microorganisme care pot fi folosite indirect judecă eventuala prezență a agenților patogeni în mediu.
Microorganisme indicatoare sanitare
trebuie să îndeplinească următoarele caracteristici
1. Trăiește constant în cavitățile naturale ale oamenilor și animalelor și fii eliberat în mediu.
2. Nu ar trebui să se reproducă în afara corpului, cu excepția produselor alimentare.
3. Durata supraviețuirii lor în mediu nu trebuie să fie mai mică și chiar puțin mai lungă decât cea a microorganismelor patogene.
4. Stabilitatea microorganismelor cu indicații sanitare din mediu trebuie să fie similară sau să o depășească pe cea a microorganismelor patogene.
5. Microorganismele indicatoare sanitare nu trebuie să aibă „duble” în mediu.
6. Microbul nu ar trebui să se schimbe în mediu.
7. Metodele de indicare și identificare a microorganismelor indicative sanitare trebuie să fie simple.
(include determinarea contaminării microbiene totale (TMC), determinarea și titrarea microorganismelor indicator sanitar).
Starea sanitară și microbiologică a aerului spațiile interioare se evaluează după numărul total de microbi (TMC) - numărul de indivizi găsiți în 1 m 3 de aer, prezența bacteriilor indicatoare sanitare: streptococi hemolitici, Staphylococcus aureus, precum și ciuperci de drojdie și mucegai.
Conform SanPiN 2.1.3.1375-03, mediul aerian al instituțiilor medicale și farmaciilor este împărțit în 4 clase în funcție de nivelul de contaminare bacteriană.
Indicatorii microbiologici pentru evaluarea mediului aerian al farmaciilor pot fi determinați prin inocularea aerului folosind metoda de sedimentare (Koch) sau aspirație (folosind aparatul Krotov).
Niveluri admisibile de contaminare bacteriană a mediului aerian al instituțiilor medicale, în funcție de acestea
scop funcțional și clasa de curățenie
| Clasa de curatenie | Denumirea sediului | Indicatori sanitari si microbiologici | |||||
| numărul total de microorganisme în 1 m 3 de aer (CFU/m 3) | numărul de colonii de S.aureus în 1 m 3 de aer (CFU/m 3) | numărul de ciuperci de mucegai și drojdie în 1 dm3 de aer | |||||
| Înainte de începere | În timpul lucrului | Înainte de începere | În timpul lucrului | Înainte de începere | În timpul lucrului | ||
| Extra pur (A) | Săli de operație, maternitate, cutii aseptice pentru bolnavi hematologici și arși, secție pentru prematuri, bloc aseptic de farmacii, cutii sterilizare (jumătate curată) laboratoare bacteriologice | nu mai mult de 200 | nu mai mult de 500 | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie |
| Curat(B) | Săli de tratament, vestiare, săli preoperatorii, săli de resuscitare, săli de resuscitare, saloane de copii, săli de colectare și pasteurizare a laptelui matern, farmacii asistent și ambalare, cameră de distilare, sedii laboratoarelor bacteriologice și clinice destinate cercetării | nu mai mult de 500 | nu mai mult de 750 | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie |
| Condițional pur (B) | sectii chirurgicale; coridoare adiacente sălilor de operație și sălilor de naștere; săli de examinare, boxe și secții ale secțiilor de boli infecțioase, săli de personal, săli de materiale, încăperi de depozitare a lenjeriei curate | nu mai mult de 750 | nu mai mult de 1000 | nu ar trebui să fie | nu mai mult de 2 | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie |
| murdar (G) | Coridoarele și spațiile clădirilor administrative, scări, camere de tratament și diagnostic, camere sanitare, toalete, lenjerie murdară | Nestandardizat |
Metoda de sedimentare(conform lui Koch) - așezarea microbilor sub influența gravitației - este o modalitate simplă de a studia microflora aerului. Constă în lăsarea vaselor Petri cu mediul deschis un anumit timp (5-10 minute pentru contaminarea totală și minim 40 minute pentru microflora cocică), apoi se închid, se etichetează și se păstrează 24 de ore în termostat și 24 de ore la temperatura camerei. Numărul de colonii crescute corespunde gradului de poluare a aerului: conform unui calcul aproximativ, pe o suprafață de 100 cm 2 se instalează în decurs de 5 minute atâția microbi cât sunt conținute în 10 litri de aer.
Metoda de aspirație– o metodă cantitativă mai precisă pentru determinarea numărului microbian de aer. Semănatul cu aer se realizează cu ajutorul dispozitivelor. Aparatul lui Krotov este proiectat în așa fel încât aerul să fie aspirat cu o viteză dată printr-o fantă îngustă a unei plăci de plexiglas care acoperă un vas Petri cu agar nutritiv. În acest caz, particulele de aerosoli cu microorganisme conținute pe ele sunt fixate uniform pe întreaga suprafață a mediului datorită rotației constante a cupei sub fanta de intrare.
După incubarea culturii într-un termostat, numărul microbian este calculat folosind formula:
| OMC | = | N ∙ 1000 |
| V |
unde N este numărul de colonii crescute pe placă;
V – volumul de aer trecut prin aparat, dm 3;
1000 - volumul necesar de aer, dm 3.
Prezența microorganismelor sanitar-indicative pentru aer - Staphylococcus aureus, streptococ hemolitic, ciuperci de mucegai, candida - este determinată de natura coloniilor crescute pe medii speciale (agar-gălbenuș, agar sânge, mediu Sabouraud) și prin examen microscopic. de bacterii din aceste colonii.
Întrebări de testare.
Care sunt caracteristicile sistemelor enzimatice bacteriene? Tipuri de enzime: după acţiunea lor; la eliberarea în mediu; enzime constitutive și adaptive. Care este semnificația practică a studierii activității enzimatice a bacteriilor? Metode de studiere a activității proteolitice și zaharolitice a bacteriilor. Medii de diagnostic diferențial: enumerați, denumiți componentele principale și aplicația. La ce schimbare de mediu reacționează indicatorul în aceste medii? După ce criterii sunt diferențiate bacteriile pe mediile Endo, Levin și Ploskirev? Ce proprietate trebuie să aibă bacteriile pentru a forma colonii colorate pe aceste medii? Dacă bacteriile formează colonii incolore, ce înseamnă asta? Hiss media, compoziția și aplicarea lor. Ce este o serie „pestrită” sau „colorată”? Mediul lui Olkenitsky, cum se face inocularea și cum sunt observate proprietățile enzimatice ale bacteriilor pe acest mediu? Metode de determinare a activității proteolitice a bacteriilor: lichefierea gelatinei, formarea indolului, hidrogen sulfurat, amoniac. Ce sunt sistemele de microtestare pentru determinarea activității enzimatice a bacteriilor: cum sunt acestea inoculate și cum sunt luate în considerare rezultatele? Ce este NIB, cum se utilizează acest sistem, cum se face însămânțarea și se înregistrează rezultatele Microflora aerului: ce microbi se găsesc cel mai des, cum se modifică microflora în funcție de condiții? Care este numărul microbian al aerului, prin ce metode se determină? Ce sunt microorganismele indicatoare sanitare? Ce microbi sunt considerați indicatori sanitari pentru aer? Ce microbi patogeni pot fi transmisi prin aer Definiti conceptele: microflora normala a corpului uman? microfloră constantă; microorganisme tranzitorii; microorganisme potențial periculoase. Numiți organele și țesuturile lipsite de microfloră permanentă. Ce microbi aparțin microflorei permanente a cavității bucale și ce semnificație au aceștia în condiții normale și patologice? Caracteristicile microflorei diferitelor zone ale corpului: cavitatea bucală, tractul gastro-intestinal, organele respiratorii. Valoarea microflorei normale este pozitivă și negativă. Ce este disbacterioza, cum se manifestă, cauzele apariției sale și metodele de prevenire și eliminare. Numiți medicamentele folosite pentru a elimina disbioza, ce conțin, cum sunt utilizate, ce se întâmplă cu ele în corpul uman.
Misiunea de muncă independentă.
1. Notați denumirile (în latină) ale tipurilor de microorganisme indicative sanitare pentru aer.
2. Scrieți numele medicamentelor utilizate pentru a elimina disbioza, compoziția și utilizarea acestora.
Lucrul elevilor pe lectie practica.
1. Izolarea unei culturi pure de bacterii – finalizare (ziua 3). Uitați-vă la culturile dvs. din lecția anterioară, pregătiți frotiuri, colorație Gram în modificarea Sinev, microscop, trageți o concluzie despre puritatea culturii izolate.
2. Studiul activității enzimatice a bacteriilor. Luarea în considerare a rezultatelor determinării activității enzimatice a bacteriilor pe mediul Hiss cu lactoză, glucoză, manitol, zaharoză și pe mediul Olkenitsky. (Demonstraţie).
3. Familiarizați-vă cu sistemele de microtestare, NIB.
4. Pregătiți un frotiu din placa dentară: aplicați o picătură de soluție salină folosind o ansă bacteriologică pe o lamă. Utilizați un bețișor de lemn steril și ascuțit pentru a îndepărta placa de pe dinți și adăugați-o la picătură. Pregătiți un frotiu după uscare și fixare, colorați folosind Gram în modificarea Sinev, microscop, schiță. Trageți o concluzie.
5. Studiul microflorei aerului. Semănați aerul în laborator folosind metoda de sedimentare folosind un aparat Krotov.
(include determinarea contaminării microbiene totale (TMC), determinarea și titrarea microorganismelor indicator sanitar).
Starea sanitară și microbiologică a solului se estimează pe baza unei comparații a numărului de bacterii termofile și bacteriene
ry – indicatori ai poluării fecale. Solurile cu predominanță de bacterii indicative sanitare sunt considerate sanitar-nefavorabile, contaminate cu fecale umane sau animale. Prezența E. coli și Enterococcus faecalis în sol indică proaspete (până la 2 săptămâni), bacterii din genurile Citrobacter și Enterobacter - învechite (până la 2 luni) și Clostridium perfringens - de lungă durată (mai mult de 2 luni) contaminare fecală. O evaluare mai precisă este efectuată folosind definiția coli-index– numărul de bacterii coliforme (coliforme) găsite în 1 g de sol, perfringens titra– masa de sol (în grame) în care a fost găsit 1 individ de Clostridium perfringens, număr total saprofit, termofil și nitrificant bacteriiîn 1 g de pământ.
Standarde microbiologice pentru evaluare stare sanitară sol:
– sol curat: coli-titru – 1 și mai mare; titrul perfringens – 0,01 și peste; TMC – 100-1000;
– sol contaminat: coli-titru – 0,9-0,01; titrul perfringens – 0,009-0,0001; TMC – 1000-100000;
– sol puternic contaminat: titrul coli – 0,009 și mai jos; titrul perfringens – 0,00009 și mai jos; TMC – 10000-4000000.
Pentru a determina TMC solul se ia la o adancime de 10-15 cm cu un cutit steril (cel putin 10 mostre din locuri diferite) intr-un borcan steril. Din probe se prepară o probă de 30 g, care se adaugă într-un balon cu apă (270 ml) și se agită bine. Se prepară diluţii de 10-3, 10-4, 10-5. Din ultimele 2 diluții, 0,1 ml se amestecă cu 40 ml de 0,7% MPA, se topesc și se răcesc la 45 0 C, apoi se toarnă în strat dublu în vase cu agar 2%. Se incubează într-un termostat. Se numără numărul de colonii crescute.
Pentru a determina titrul de coli, titrul de perfringens Diferite diluții ale suspensiei de sol sunt inoculate în volume de 1 ml în eprubete cu mediu Kessler. Se incubează la 43 0 C timp de 48 de ore. Când se obține formarea de gaz și turbiditatea în mediu, însămânțarea se realizează cu o buclă pe mediul Endo. Sunt selectate colonii tipice pentru E. coli, se fac frotiuri, se colorează Gram și se examinează microscopic. Dacă în frotiuri sunt detectate baghete gram-negative, se efectuează un test de oxidază. Dacă proba este negativă, se verifică proprietățile enzimatice ale culturii izolate inoculând-o pe mediu semi-lichid cu glucoză. Apariția acidului și a gazelor în mediu confirmă prezența E. coli. Titrul de coli este determinat de cel mai mic volum în care sunt detectați coliforme.
Pentru a determina titrul de perfringens, diferite diluții ale suspensiei de sol sunt inoculate în eprubete cu un mediu steril de sulfit de fier Wilson-Blair. După 48 de ore de incubare la 43 0 C, se iau în considerare rezultatele formării coloniilor negre de C. perfringens în coloana de agar a mediului. Frotiurile sunt colorate cu Gram, examinate microscopic (tije gram-pozitive mari cu spori de formă ovală, localizare centrală sau subterminală), și se calculează titrul perfringens (cea mai mare diluție a inoculului, a cărui inoculare duce la înnegrirea și ruperea mediu în primele 12 ore de creştere la 43 0 C).
Starea sanitară și microbiologică a apei potabile evaluat de numărul total de microbi (TMC)– numărul de microorganisme anaerobe facultative mezofile (MEFAM) în 1 ml apă; prezenţă bacterii coliforme comune și termotolerante.
Conform indicațiilor epidemiologice, prezența enterococilor, salmonelei, shigella, vibrio și enterovirusurile este determinată suplimentar în apă.
Determinarea numărului total de microorganisme
Numărul total de microbi (TMC) - numărul total de microorganisme aerobe mezofile și anaerobe facultative capabile să formeze colonii pe agar nutritiv la t = 37 0 C timp de 24 de ore, vizibile cu o creștere de 2 ori.
Din fiecare probă de apă se inoculează cel puțin două volume de 1 ml. Pentru a face acest lucru, adăugați 1 ml de apă într-un vas Petri steril, turnați 6-8 ml de agar nutritiv topit și răcit la 45-46 0 C, amestecați bine. După ce agarul s-a solidificat, plăcile sunt plasate cu susul în jos și incubate la 37 0 C timp de 24 de ore. Apoi sunt numărate toate coloniile crescute pe placă, observate la o mărire de 2x. Numărul numărat de colonii de pe fiecare placă este însumat și împărțit la 2. Rezultatul este exprimat în CFU (unități formatoare de colonii) în 1 ml din proba de apă testată.
Determinarea bacteriilor coliforme comune și termotolerante
LA bacterii coliforme comune Acestea sunt baghete gram-negative, care nu formează spori, care nu au activitate oxidazică și fermentează lactoza sau manitolul cu formarea de aldehidă, acid și gaz la 37 0 C timp de 24 de ore.
Bacteriile coliforme termotolerante au toate caracteristicile bacteriilor coliforme comune, dar, în plus, sunt capabile să fermenteze lactoza până la acid și gaz la 44 0 C timp de 24 de ore.
(conform SanPiN 2.1.4.559–96)
Note: 1 – la determinare se efectuează un studiu dublu de 100 ml din proba de apă selectată; 2 – depășirea standardului nu este permisă în 95% din probele prelevate la punctele de colectare a apei externe și interne reteaua de alimentare cu apaîn termen de 12 luni, numărul de probe testate fiind de cel puțin 100 pe an; 3 – determinarea se efectuează numai în sistemele de alimentare cu apă din surse de suprafață înainte de alimentarea cu apă a rețelei de distribuție; 4 – determinarea se efectuează numai la evaluarea eficienței tehnologiei de tratare a apei.
Metoda filtrului cu membrană
Filtrul cu membrană este plasat într-o pâlnie Seitz montată într-un balon Bunsen, care este conectat la o pompă de vid. Apa se filtrează într-un volum de 333 ml. Apoi filtrele Seitz sunt plasate pe suprafața mediului Endo în vase Petri și după incubare la 37 0 C timp de 24 de ore, se numără numărul de colonii crescute tipic coliformilor. Din 2-3 colonii roșii se prepară frotiuri, se colorează cu Gram și se efectuează un test de oxidază, care face posibilă diferențierea bacteriilor din genurile Escherichia, Citrobacter și Enterobacter de bacteriile gram-negative din familia Pseudomonadaceae și alte oxidaze pozitive. bacterii care trăiesc în apă. Pentru a face acest lucru, filtrul cu colonii de bacterii crescute pe el este transferat cu o pensetă, fără a-l răsturna, pe un cerc de hârtie de filtru umezită cu dimetil-n-fenilendiamină. În prezența oxidazei, indicatorul transformă colonia în albastru. 2-3 colonii care nu și-au schimbat culoarea inițială se inoculează într-un mediu semi-lichid cu o soluție de glucoză 0,5%. Culturile sunt incubate timp de 24 de ore la 37 0 C. Dacă este prezentă formarea de gaz, se numără numărul de colonii roșii de pe filtru.
Metoda de fermentare
Se inoculează 3 volume de apă cu câte 100 ml fiecare (pentru analiză calitativă) sau la testarea apei în scopul determinării cantitative a bacteriilor coliforme totale, se inoculează 3 volume cu 100 ml fiecare, 3 cu 10 ml fiecare și 3 cu 1 ml fiecare.
Inocularea a 100 ml şi 10 ml apă se efectuează în 10 şi 1 ml mediu concentrat lactoză-peptonă, inocularea a 1 ml apă în 10 ml mediu de concentraţie normală.
Culturile sunt incubate la 37 0 C timp de 24-48 ore. După 24 de ore de la mediul nutritiv, unde prezența creșterii și formarea gazelor, scroafă în sectoare pe mediu Endo preparat cu adaos de fucsin.
Rezultat pozitiv Prezența bacteriilor coliforme comune într-un anumit volum de apă este indicată de turbiditate și formare de gaze pe mediul de acumulare (mediu glucoză-peptonă sau mediu lactoză-peptonă) și prezența coloniilor roșii pe mediul Endo. În cazuri îndoielnice, se efectuează un test de oxidază și se confirmă capacitatea de a forma gaze pe un mediu cu lactoză sau manitol (glucoză).
Rezultatul este negativ, Dacă
– nu există semne de creștere în mediul de acumulare,
– nu există o creștere a coloniilor pozitive pentru lactoză pe sectoare ale mediului Endo,
– colonii necaracteristice pentru bacteriile coliforme au crescut în sectoare ale mediului Endo,
– toate coloniile s-au dovedit a fi oxidaza-pozitive,
– dacă la un test de confirmare pe un mediu cu lactoză sau manitol (glucoză) nu s-a observat nicio formare de gaz.
Cel mai probabil număr(NPF) bacterii (bacteriile coliforme generale și termotolerante) - calculate folosind tabele speciale.
Starea sanitară și microbiologică a aerului spațiile interioare se evaluează după numărul total de microbi (TMC) - numărul de indivizi găsiți în 1 m 3 de aer, prezența bacteriilor indicatoare sanitare: streptococi hemolitici, Staphylococcus aureus, precum și ciuperci de drojdie și mucegai.
Conform SanPiN 2.1.3.1375-03, mediul aerian al instituțiilor medicale și farmaciilor este împărțit în 4 clase în funcție de nivelul de contaminare bacteriană.
Indicatorii microbiologici pentru evaluarea mediului aerian al farmaciilor pot fi determinați prin inocularea aerului folosind metoda de sedimentare (Koch) sau aspirație (folosind aparatul Krotov).
Niveluri admisibile de contaminare bacteriană a mediului aerian al instituțiilor medicale, în funcție de acestea
scop funcțional și clasa de curățenie
| Clasa de curatenie | Denumirea sediului | Indicatori sanitari si microbiologici | |||||
| numărul total de microorganisme în 1 m 3 de aer (CFU/m 3) | numărul de colonii de S.aureus în 1 m 3 de aer (CFU/m 3) | numărul de ciuperci de mucegai și drojdie în 1 dm3 de aer | |||||
| Înainte de începere | În timpul lucrului | Înainte de începere | În timpul lucrului | Înainte de începere | În timpul lucrului | ||
| Extra pur (A) | Săli de operație, maternitate, cutii aseptice pentru bolnavi hematologici și arși, secție pentru prematuri, bloc aseptic de farmacii, cutii sterilizare (jumătate curată) laboratoare bacteriologice | nu mai mult de 200 | nu mai mult de 500 | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie |
| Curat (B) | Săli de tratament, vestiare, săli preoperatorii, săli de resuscitare, săli de resuscitare, saloane de copii, săli de colectare și pasteurizare a laptelui matern, farmacii asistent și ambalare, cameră de distilare, sedii laboratoarelor bacteriologice și clinice destinate cercetării | nu mai mult de 500 | nu mai mult de 750 | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie |
| Condițional pur (B) | sectii chirurgicale; coridoare adiacente sălilor de operație și sălilor de naștere; săli de examinare, boxe și secții ale secțiilor de boli infecțioase, săli de personal, săli de materiale, încăperi de depozitare a lenjeriei curate | nu mai mult de 750 | nu mai mult de 1000 | nu ar trebui să fie | nu mai mult de 2 | nu ar trebui să fie | nu ar trebui să fie |
| murdar (G) | Coridoarele și spațiile clădirilor administrative, scări, camere de tratament și diagnostic, camere sanitare, toalete, lenjerie murdară | Nestandardizat |
Metoda de sedimentare(conform lui Koch) - așezarea microbilor sub influența gravitației - este o modalitate simplă de a studia microflora aerului. Constă în lăsarea vaselor Petri cu mediul deschis un anumit timp (5-10 minute pentru contaminarea totală și minim 40 minute pentru microflora cocică), apoi se închid, se etichetează și se păstrează 24 de ore în termostat și 24 de ore la temperatura camerei. Numărul de colonii crescute corespunde gradului de poluare a aerului: conform unui calcul aproximativ, pe o suprafață de 100 cm 2 se instalează în decurs de 5 minute atâția microbi cât sunt conținute în 10 litri de aer.
Metoda de aspirație– o metodă cantitativă mai precisă pentru determinarea numărului microbian de aer. Semănatul cu aer se realizează cu ajutorul dispozitivelor. Aparatul lui Krotov este proiectat în așa fel încât aerul să fie aspirat cu o viteză dată printr-o fantă îngustă a unei plăci de plexiglas care acoperă un vas Petri cu agar nutritiv. În acest caz, particulele de aerosoli cu microorganisme conținute pe ele sunt fixate uniform pe întreaga suprafață a mediului datorită rotației constante a cupei sub fanta de intrare.
După incubarea culturii într-un termostat, numărul microbian este calculat folosind formula:
| OMC | = | N ∙ 1000 |
| V |
unde N este numărul de colonii crescute pe placă;
V – volumul de aer trecut prin aparat, dm 3;
1000 - volumul necesar de aer, dm 3.
Prezența microorganismelor sanitar-indicative pentru aer - Staphylococcus aureus, streptococ hemolitic, ciuperci de mucegai, candida - este determinată de natura coloniilor crescute pe medii speciale (agar-gălbenuș, agar sânge, mediu Sabouraud) și prin examen microscopic. de bacterii din aceste colonii.
Întrebări de securitate
Care sunt caracteristicile sistemelor enzimatice bacteriene? Cum este reglată producția de enzime în bacterii? Ce grupe de enzime se disting în funcție de mecanismul prin care este reglată producția de enzime? Care este semnificația practică a studierii activității enzimatice a bacteriilor? Metode de studiere a activității zaharolitice și proteolitice a bacteriilor. Medii de diagnostic diferențial: enumerați, denumiți componentele principale și aplicația. La ce schimbare de mediu reacționează indicatorul în aceste medii? După ce criterii sunt diferențiate bacteriile pe mediile Endo, Levin și Ploskirev? Ce proprietate trebuie să aibă bacteriile pentru a forma colonii colorate pe aceste medii? Dacă bacteriile formează colonii incolore, ce înseamnă asta? Hiss media, compoziția și aplicarea lor. Ce este o serie „pestrită” sau „colorată”? Mediul lui Olkenitsky, compoziția sa; Cum se face însămânțarea și cum se notează fermentația diverșilor carbohidrați și formarea hidrogenului sulfurat pe acest mediu? Care sunt sistemele de microtestare pentru determinarea activității enzimatice a microbilor; Cum se face însămânțarea și cum se iau în considerare rezultatele? Ce este NIB; Cum se utilizează acest sistem, cum se face însămânțarea și se înregistrează rezultatele? Indicați principalele obiecte ale mediului extern care sunt supuse examinării sanitare și bacteriologice. Microbiocenoza, definiția conceptului. Enumerați și caracterizați relațiile interspecifice în microbiocenoze. Ce indicatori sunt determinați în timpul evaluării bacteriologice a obiectelor de mediu? Microorganisme indicative sanitare: definirea conceptului. Ce proprietăți ar trebui să aibă microorganismele sanitar-indicative? Listați microorganismele indicatoare sanitare pentru aer, apă, sol. Microflora apei: microflora permanenta, surse de poluare. Indicatori pentru evaluarea sanitară și bacteriologică a apei. Metodologia de determinare a numărului microbian total al apei. Indicatori ai poluării apelor fecale, metode de determinare a acestora. Precizați valorile maxime admise pentru apa potabilă. Microflora aerului: microflora permanenta, surse de poluare. Indicatori pentru evaluarea sanitar-bacteriologică a aerului, metode de determinare a acestora. Microflora solului: microflora permanentă, importanța sa pentru ciclul substanțelor din natură. Surse de contaminare a solului cu microorganisme patogene. Indicatori pentru evaluarea sanitară și bacteriologică. Pentru ce boli pot fi factorii de transmitere apa, aerul sau solul? Forme necultivabile de bacterii: definiția conceptului, semnificația practică.
Sarcini de finalizat în timpul procesului de auto-studiu
Notați denumirile (în latină) ale tipurilor de microorganisme indicative sanitare pentru apă, aer și sol.
Munca independentă student la o lecție practică
1. Izolarea unei culturi pure de bacterii aerobe (a 3-a zi). Examinați cultura pe agar înclinat macroscopic, pregătiți un frotiu, colorație Gram, microscop, trageți, trageți o concluzie despre puritatea culturii. Pentru a identifica în continuare cultura izolată, semănați-o pe mediul seriei „pestrițe” și pe mediul lui Olkenitsky. Studiați culturile gata făcute de bacterii aerobe pe mediul seriei „pestrițe” și pe mediul lui Olkenitsky, alcătuiți un tabel „Activitatea biochimică a microorganismelor”. Familiarizați-vă cu metodologia de studiu a activității enzimatice a bacteriilor folosind sisteme de microtestare și NIB.
2. Izolarea unei culturi pure de anaerobi (a 4-a zi). Studiați modelul de creștere al culturii pe mediu Kitt-Tarozzi, pregătiți un frotiu, colorație Gram, microscop, desenați.
3. Studiul microflorei apei și aerului. Cultivați apa de la robinet pentru a determina numărul total de microbi (TMC). Determinați indicatorii contaminării apei fecale (prezența bacteriilor coliforme) folosind culturi demonstrative și tabel. Semănați aerul de laborator folosind metoda de sedimentare și folosind un aparat Krotov.
4. Metode de studiere a microflorei normale a corpului uman (pregătirea pentru următoarea lecție). Luați mucusul din gâtul celuilalt cu un tampon steril și inoculați-l într-o eprubetă cu bulion de carne-peptonă de zahăr. Faceți o cultură din pielea mâinilor pe o cană cu MPA: luați un tampon mic de bumbac steril, înmuiați-l în soluție salină sterilă, ștergeți pielea, faceți o cultură cu acest tampon.